⑸ 肉和肉制品中色素的测定
1) 前处理
称处理样→加海砂3g和20ml丙酮→于研钵中一起研→除去脂肪和水分→除去丙酮
2) 解吸样液中的色素
将上面沉淀物放入布氏漏斗→用解吸液从肉蛋白中使色素全部解吸下来→加热到70℃→用1︰10H2SO4调PH再加1ml10%钨酸钠→使蛋白质全部凝聚沉淀→用布氏漏斗抽滤→用70℃水20ml洗漏斗→收集全部滤液
3) 吸附样液中的色素
称1g聚酰胺粉+上面的滤液→搅拌→抽滤→用水洗漏斗中沉淀物→直到滤水与原水PH相同
4) 解吸样液中色素(与非酒精性饮料相同)
⑹ 果脯类色素的测定
1) 处理
取样研碎后称2g→加50ml水→加热70℃使溶解
2) 吸附
吸附剂1g+上述液→抽滤→用70℃热水洗沉淀物
3) 除天然色素
用甲醇-甲酸(6︰4)混合液解吸天然色素→直到滤液无色为止→再加甲醇10ml进一步除天然色素→70℃热水洗，不断搅拌
4) 解吸
用解吸液解吸样品沉淀物中全部人工合成色素→浓液解吸液(甲醇、氨)直到无甲醇、氨时→用1︰10H2SO4调pH=4→再按上述加吸附剂操作重复1-2次，把天然色素全部去净为止，最后解吸、定容同上。
⑺ 各种加工蔬菜中色素的测定
这一类色素测定按理论应该以蜜饯的操作来处理，但在实验中这些样品胶体过多，使解吸、过滤等操作非常困难，所以我们应该按下述方法进行：取样 20g(干菜2g)，加入100ml 80%的乙醇溶液，浸泡2小时，再以含有1%氨水的70%乙醇反复浸出，合并浸出液，直到色素全部被洗脱下来，置70-80℃水浴上，将全部浸出液浓缩，待氨全部逸出去(没有氨味)，调pH=4，加1g聚酰胺吸附，然后用布氏漏斗过滤，以200ml 70-80℃水洗涤漏斗的聚酰胺粉，然后用甲醇-甲酸洗脱天然色素。以上操作同蜜饯中色素的测定方法。
⑻ 提纯色素溶液的纸层析定性
为了判断样品中存在有几种色素以及是什么色素，必须进行纸层析进行鉴定。
经浓缩后样品色素溶液→于新华中速层析滤纸上点样→点样量3-5微升(若样品含量低可取出1ml在浓缩至0.2ml再点样)→点样点的直径应不超过2毫米为宜→点样线距底边2厘米→样点间距离以及左右纸边各距2厘米→用展开剂展开→测量各色素点的Rf值→于标准色素Rf值对照→确定何种色素(以标准色素斑点Rf值衡量样品各色素斑点的Rf值是否于标准点在同一条直线上，色素的颜色是否完全一致，就可确定样品色素属于何种色素)。
Rf(比移值)=斑点移动距离/溶剂前沿距离
所使用的展开剂有：
1)正丁醇︰无水乙醇︰1%氨水 = 6︰2︰3
2)正丁醇︰吡啶︰1%氨水 = 6︰3︰4
3)异丁醇︰无水乙醇︰水 = 3︰2︰2
⑼ 提纯色素溶液的薄层分离和定量
经过纸层析定性之后，含有一种色素的样液定容之后，离心即可定量;含有两种以上的复合色素的样品溶液，需要经过薄层分离为单色素后，再用比色法分别定量，测定出各种色素的含量。
具体步骤是：薄层板制板→点样层析→比色→标准曲线绘制→计算含量
1) 薄层板制备
聚酰胺粉1g于研钵中→加15ml 75%甲酸→搅拌，使聚酰胺全部溶解→加7.5g硅胶G→研磨1分钟→立即涂板(玻璃板要求光滑平整，先用水洗净，干燥后用酒精擦拭干净，涂板时可用涂本器或手工玻璃涂布)→可涂15×10厘米玻璃板三块(厚度为0.25-0.3毫米)→玻璃板放入盛有少量水的大玻璃缸中→盖好盖子→使玻璃板中的甲酸由缸底的水吸取→放2-3小时→取出玻璃板→于空气中风干→于60-65℃烘箱30分钟→放入干燥器中备用
2) 点样层析
用点样管(毛细管、微量注射器)将浓缩并定容的样液点在薄层板上→基线距底边2厘米→点成与底边平行的条状→两端距边各为2厘米，点样量一般为0.4ml→点样时要用电吹风机边点边吹干→然后进行展层析
展层缸先用溶剂系流30分钟→再把点好样的薄层板放入展析缸用上行法展开→薄板下端浸入溶液0.5-1厘米→大约1小时看色素已明显分开后→即可取出薄板→晾干
对溶剂系流的选择是：a) 分离胭脂红、苋菜红、新红、柠檬黄、桔黄、靛蓝等用正丁醇︰吡啶︰5%氨水=6︰6︰4(这种展开剂主要分离靛蓝，因为靛蓝上升很快，其它上升很慢); b) 分离柠檬黄、胭脂红、苋菜红、柠檬黄、桔黄等时用展开剂为2.5%柠檬酸钠︰氨水=4︰3(柠檬黄上升很快，其它上升慢);c) 对于分离两种红色素(苋菜红、胭脂红)的食品用甲醇︰乙二胺︰氨水=10︰3︰4(主要是苋菜红与胭脂红上升快，其它色素上升慢)。
3) 比色定量
将薄层板展开后→用小刀分别将各条色斑刮下→移入砂芯漏斗→用乙醇氨溶液解吸抽滤→于水浴上蒸发到无氨味→定容10ml→分别测出消光值E(根据各种色素的最大吸收波长测定其光密度)→从标准曲线上查出相应的各色素含量.
4) 标准曲线的制备
先配成标准色素贮备液(100微克/ml)，称0.1g标准色素加水稀释至1000ml
10ml比色管 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
标准应用液 0 0.1 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0
加水 分别加水至10ml
相当于μg/ml 0 1 5 10 20 30 40 50 60 70
分别测出EO-E9的消光值以水为参比，以色素浓度为横生标，消光值为纵坐标，绘制标准曲线。以水为参比，pH值为6，各色素的最大吸收波长为下：
胭脂红 508纳米;柠檬黄 428纳米;苋菜红 520纳米;
晚霞黄 485纳米;赤藓红 528纳米;靛蓝 610纳米;
注意事项
1) 上述两个公式若乘以1/100，即由mg/㎏变为几/万。例如胭脂红含量为80mg/㎏即0.8/万;2) 聚酰胺粉吸附要求预先活化，并要求在一定的温度、pH和一定的作用时间下进行，操作时要注意。聚酰胺在酸性条件下吸附色素牢固，用水洗涤聚酰胺粉以除去可溶性物质，要求水偏酸性(pH=4)，防止聚酰胺上色素在洗涤过程中脱落下来;
3)样品的前处理和提纯过程很重要，要充分去除杂质(油脂、蛋白质、淀粉、糖)以免影响吸附及层析效果。
一般能溶解在水中的物质，如食盐、糖、味精、香精等，在用酸性水洗涤聚酰胺粉时都能除去，还有明胶、果胶也可以通过大量水除去;对油脂类可以用丙酮或石油醚洗涤脱脂，如果油脂含量很高，可在研钵中用丙酮、海砂研磨除去;对于样品中蛋白质、淀粉含量高时，可用蛋白酶或钨酸钠、淀粉酶水解后除去;对于天然色素可用6︰4甲醇-甲酸除去;
4) 纸层析定性时不可皱折，边缘应剪齐，不可有毛边，而且要注意纸的横、竖向，应顺纹上行，展开较好，否则结果不规律;
5) 在浓缩样液时应控制水浴温度70-80℃，应使缓慢蒸发，勿溅出皿外，防止色素干结在蒸发皿的壁上(应经常摇动蒸发皿);
6) 靛蓝褪色由深兰色→浅兰色→黄色→无色。靛蓝褪色是由于光、氧、温度高、PH等多种因素的影响，测定靛蓝时要注意上述因素的影响;
7) 展开剂使用时最好2天换一次，以保证分离效果，放置时间过长造成浓度和极性都起变化，影响分离效果;
8)漏斗用完后要洗净，先用浓HCl20ml少量多次洗，然后用水多次冲洗，否则影响下一个样品的吸附或解吸作用;
9) 聚酰胺粉可回收使用。使用过的聚酰胺收集于干净的烧杯中，用0.5%NaOH溶液浸泡24小时之后水泵抽干，倒回烧杯，加0.1N HCl泡30分钟，然后再用水泵抽干，用水洗至中性，置60℃烘箱烘干备用;
10) 比色时样液要求清晰，若混浊使E增大，影响结果，如果混浊可离心也可放置。
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