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多肽链氨基酸序列分析方法及关键试剂名称：2013年临床助理医师
氨基酸序列分析
1.步骤一：分析已纯化蛋白质的氨基酸组成
2.步骤二：测定多肽链的氨基末端与羧基末端为何种氨基酸。以前用二硝基氟苯，现多用丹酰氯
3.步骤三：将肽链水解成片段(表1-2)。
表1-2 三种肽链水解方式的比较
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胰蛋白酶 |
胰凝乳蛋白质酶 |
溴化氢法 |
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作用部位 |
赖氨酸或精氨酸羧基侧的肽键 | 芳香族氨基羧基侧的肽键 | 甲硫氨酸羧基侧的肽键 |
赖氨酸或精氨酸羧基侧的肽键 芳香族氨基羧基侧的肽键 甲硫氨酸羧基侧的肽键
4.步骤四：测定各肽段的氨基酸排列顺序，采用Edman降解法，试剂为异硫氰酸苯酯
5.步骤五：统计学分析，组合排列对比，得到完整肽链氨基酸排列顺序
通过核酸来推演蛋白质中的氨基酸序列的步骤：
1.步骤一：分离编码蛋白质的基因
2.步骤二：测定DNA序列
3.步骤三：排列出mRNA序列
4.步骤四：按照三联密码的原则推演出氨基酸的序列
蛋白质空间结构测定
蛋白质二级结构含量测定：圆二色光谱法，测α-螺旋较多的蛋白质时，结果较为准确。
蛋白质三维空间结构测定：X射线衍射法和磁共振技术。
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