1.4 血药浓度测定法

　　1.4.1 ATRA对照溶液配制

　　精密称取ATRA对照品适量，以甲醇溶解并定容，制得浓度为100 μg・mL-1的ATRA储备液。将ATRA储备液以甲醇稀释，配制浓度分别为0.5、1、2.5、5、10、25、50 μg・mL-1的ATRA对照溶液。

　　1.4.2 内标液配制

　　取内标阿维A酸适量，置于100 mL量瓶中，以甲醇溶解并定容，制得浓度为7.5 μg・mL-1的内标液。

　　1.4.3 样本处理

　　精密吸取血浆样品1 mL，置10 mL具塞离心试管中，加入内标溶液20 μL，旋涡混合30 s。加入1 mol・L-1的HCl溶液500 μL，漩涡混合30 s，再加入乙酸乙酯3 mL，旋涡混合1 min，4 500 r/min离心5 min。转移上层液至尖底试管中，于37 ℃水浴中氮气流吹干。残渣加入流动相200 μL漩涡混合30 s使溶解，10 000 r/min离心5 min，取上清液50 μL进样，记录色谱图，以ATRA峰面积(As)与内标峰面积(Ai)之比代入标准曲线计算ATRA血药浓度。

　　1.4.4 标准曲线

　　精密量取空白血浆1 mL，置10 mL具塞离心管中，分别加入不同浓度ATRA对照溶液20 μL，混匀，使血药浓度分别为10、20、50、100、200、500、1000 ng・mL-1。按样本处理方法操作，以不同浓度ATRA系列溶液的As和Ai来计算A(A=As/Ai)，以A值为纵坐标，ATRA质量浓度(ρ)为横坐标进行直线回归。

　　1.4.5 回收率及精密度

　　分别于1 mL空白血浆中加入低、中、高3种浓度的ATRA对照溶液20μL，混匀，使其浓度分别为10、200、1000 ng・mL-1，按样本处理方法操作，计算ATRA血药浓度，以测得浓度与配制浓度之比计算方法回收率。另以甲醇配制相应系列浓度的ATRA溶液，不经提取直接测定，以此为标准，将两组峰面积相比，计算ATRA萃取回收率。以1 d内测得的ATRA浓度计算日内精密度，以1周内5次测定的ATRA浓度计算日间精密度。

　　2 结 果 1 色谱行为

　　在上述色谱条件下，ATRA与内标物及血浆内源性物质能够较好分离，ATRA与内标的保留时间分别为8.8 min和6.7 min。空白血浆及血浆样品色谱图见图1。 2 线性范围

　　ATRA血药质量浓度(ρ)在10～1000 ng・mL-1范围内，与峰面积比(A)有良好线性关系，其回归方程为：A=00116ρ+0.0036，r=0.9997。以信噪比S/N=3：1 计，ATRA最低检测浓度为2.5 ng・mL-1。 3 回收率及精密度

　　高、中、低3种浓度的提取回收率分别为(84.6±5.2)%、(81.2±6.3)%、(81.6±4.6)%，平均方法回收率为(94.5±4.7)%(n=15)。3种浓度的日内 RSD≤4.1%，日间RSD≤6.2%。结果见表1。表1 回收率及精密度(略)

　　3 讨 论

　　本文建立了一种灵敏、准确的ATRA血药浓度高效液相色谱测定法，适用于APL病人ATRA 血药浓度的常规监测及临床药代动力学研究。通过监测ATRA血药浓度，可以更好地了解在某些APL病人连续用药治疗中临床复发及耐药的原因。

ATRA化学性质活泼，见光易异构化或氧化降解，因此在样品提取过程中应特别注意避光操作。提取过程中血浆加入1 mol・L-1 HCl溶液，使血浆酸化，可提高萃取回收率，乙酸乙酯一步萃取可使萃取回收率达到80%以上。