采用杀菌剂室内生长速率法测定[10]。上述药剂均用无菌水配制成系列浓度梯度的溶液，在无菌操作台上将不同梯度的药剂加入到灭过菌的冷却到40～50 ℃的PDA培养基中，倾入后立即水平方向平稳摇动三角瓶，使药剂在培养基中均匀分布后倒平板。在每个平板中央接入一块直径为0.5 cm的菌苔，以不加药剂为空白对照。25 ℃恒温黑暗培养6 d后用“垂直十字交叉法”测量菌落直径，检查药剂的抑菌效果，每处理5皿，重复3次。

将PDA培养基放入121 ℃高压灭菌20 min。按每个三角瓶分装60 mL。分装后放在无菌操作台上，用移液枪移入被稀释后的不同浓度的农药，并摇匀。然后快速将其分别倒入3个培养皿中。每个培养皿倒入20 mL，待其冷却凝固后在培养皿左上方贴标签纸标记(预备做农药抑菌试验的农药的编号)，然后用打孔器将供实验菌打孔，移入培养皿内[4]。然后将培养皿倒置于培养箱中，25 ℃恒温黑暗培养6 d，观察并测定抑菌圈直径。检查药剂的抑菌效果，每处理3皿，重复3次。通过十字交叉法对抑菌圈的大小进行测定。

抑菌率=■×100%

将药剂对菌丝的抑制率转换成几率值(y)，药剂各浓度(mg/L)转换成对数值(x)，进行线性回归分析，求出毒力回归方程和相关系数，最后计算出各药剂对病菌菌丝生长的抑制中浓度(EC50)。

1.4 数据分析

试验数据的分析均用SPSS 11.5和Excel 2003完成。

2 结果与分析

2.1 杀菌剂对病原菌EC50的比较

不同药剂对炭疽病病原菌菌丝生长的抑制中浓度(EC50)见表2。从表2中可以看出，13种药剂对炭疽病病原菌菌丝的生长速度具有不同程度的抑制作用，抑制效果表现出明显的差异。

从各药剂的毒力回归方程和EC50可以看出，13种药剂中好力克、丙环·咪鲜胺和施保功3种杀菌剂对病菌的毒力作用最强，EC50值分别为0.002 2、0.005 6和0.009 3 mg/L;其次是福星，EC50为0.17 mg/L;施保克EC50为1.11 mg/L，百泰EC50为1.23 mg/L，凯特EC50为1.57 mg/L，世高EC50为1.83 mg/L，凯润EC50为4.22 mg/L，溴菌腈EC50为4.42 mg/L，相对较低;而腈菌唑、翠贝和二氰蒽醌对病菌的抑制作用差，其中二氰蒽醌的抑制作用最差，EC50值达到106.99 mg/L。

2.2 病原菌对杀菌剂的敏感性比较

回归方程的斜率越大，表明病菌对该杀菌剂的敏感性越差。杀菌剂按照斜率值(表2)从大到小排序依次为二氰蒽醌、腈菌唑、溴菌清、施保克、翠贝、凯润、凯特、世高、百泰、福星、施保功、好立克和丙环·咪鲜胺，说明病菌对施保功、好立克和丙环·咪鲜胺最敏感。

3 讨论

通过分析各药剂的毒力回归方程斜率值与其EC50值，综合分析认为溴菌清、施保克、凯润、凯特、世高、百泰、福星、施保功、好立克、丙环·咪鲜胺10种药剂的抑菌效果较好。其中施保克对病菌的EC50值较低，且斜率值较高，成为最具潜力的使用药剂。其他药剂也具有很好的应用价值，在生产上可以轮换使用，防止病菌产生耐药性。

筛选出的10种杀菌剂有着不同的作用方式，其中施保克为咪唑类杀菌剂，主要作用方式是抑制甾醇类生物合成，虽然不具有内吸作用，但具有一定的传导性能。苯醚甲环唑、丙环唑、氟硅唑、戊唑醇属于三唑类杀菌剂，其作用机理为影响甾醇类生物合成，使菌体细胞膜功能受到破坏，具有内吸性。吡唑醚菌酯是甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，来源于天然抗生素，为线粒体呼吸抑制剂，不仅具有广谱的生物活性，更具有高度的选择性，对环境安全。室内药剂筛选的结果虽可以看出药剂对菌丝具有抑制作用，但由于受很多因素的影响，培养皿内的抑菌活性和在田间使用上的作用效果不一定完全一致，因此还有待作进一步田间的防治效果试验。

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