4、 Thuijls等研究发现重症NEC患儿在早期血I-FABP水平即明显升高。当临床出

现轻度腹胀，大便隐血阳性怀疑NEC时，血、尿I—FABP水平在发展成为重症NEC的患儿

会明显高于诊断为其他疾病和病情稳定在NECI期或Ⅱ期的患儿。

主要参考文献

1、 Hans Van Goudoever，陈超，张蓉.新生儿坏死性小肠结肠炎的热点问题.中国循证儿科杂志 2011，06(5).

2、 邹静静，陈运彬.TOLL样受体在新生儿坏死性小肠结肠炎中的表达及作用.中国新生儿科杂志 2012,27(5).

3、 李志杰，刘靖华，姜勇.ToLL样受体的发现及其研究进展.中国危重病急救医学，2003,15:694-697.

4、 Viriyakosol S,Tobias  PS,Kitchens RL,et al..MD-2 binds to bacterial lipopolysaccharide.J Biol Chem，2001,276:38044-38051.

5、 Johnson GB, Bruun GJ,Kodaira Y,et al.Receptor-mediated monitoring of tissue well-being via detection of soluble heparin sulfate by Toll-like receptor4.J Immunol，2002,168:5233-5239.

6、 Gribar SC,Sodhi CP,Richardson WM,et al.Reciprocal expression and signalingof TLR4 and TLR9 in the pathogenesis and treatment of necrotizing enterocolitis.J Immunol，2009,182:636-646.

7、 冯杰雄.美国新生儿坏死性小肠结肠炎研究现状.中华小儿外科杂志.2006，27(7).

8、 沈涤华，施诚仁，吴燕，等.肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)在肠缺血早期诊断的意义[J].中华小儿外科杂志，2004，25(2)：176—179.

(可续页)

二、研究方案

1.研究目标、研究内容和拟解决的关键问题

NEC分三期：

一期为可疑病例，有非特异性症状，此时患儿体温不稳定，嗜睡、呼吸暂停，胃肠道症状包括吃奶差、胃潴留、呕吐、轻微腹胀，腹部X线平片可以正常或肠扩张。

二期为确诊病例;

三期为重症病例，死亡率高。

研究目标：

通过检测血清TLR4及肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)水平，探寻两者在早期诊断新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)中的价值。

研究内容：

 实验分组

实验组：共二组

早期NEC组：NEC一期患儿

晚期NEC组：NEC二期患儿、NEC三期患儿。

对照组：正常新生儿

所选病例均为早产儿

 各组研究对象均空腹采血(时机：纳入实验组后24小时内)。

 对照组于出生后1—5 d内抽血检查。

 标本：使用不含热原和内毒素的试管，室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

 用ELISA方法测定血清中TLR4及肠型脂肪酸结合蛋白水平。

 试剂盒：上海裕平生物科技有限公司生产的人Toll样受体4(TLR4)ELISA试剂盒和I-FABP试剂盒。

对比检测结果，观察实验组中各期患儿TLR4及肠型脂肪酸结合蛋白水平，与对照组进行比较。

拟解决的关键问题：

通过本研究观察早期NEC组和晚期NEC组TLR4及肠型脂肪酸结合蛋白水平，各期间TLR4及肠型脂肪酸结合蛋白水平是否存在差异。

2.拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析

研究方法：

采用病例对照研究方法分析TLR4和肠型脂肪酸结合蛋白在NEC患儿血清中的浓度变化，探讨二者与NEC的关系。

统计学分析：

 采用SPSSl6.0统计软件。

 正态分布的计量资料采用数据以均数±标准差表示, 组间比较采用单项方差分析，两两比较应用LSD法;

 非正态分布计量资料采用中位数(四分位间距)(M(Q))表示，组间比较采用秩和检验;

 计数资料采用构成比表示，统计学分析采用χ2检验或Fisher精确检验

 血清TLR4及肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)水平与NEC严重程度的相关性分析采用spearman相关分析

 p<0.05表示差异有统计学意义

技术路线：

选取合适的实验组和对照组→采集血标本→进行试验→整理数据→数据统计分析

→撰写论文

3. 本课题的创新之处

通过研究，探索性发现能早期诊断NEC的较敏感的生化指标，为诊断提供依据 。

4、研究计划及预测进展

2012年6月-2013年2月，阅读文献，论证课题可行性，并报经医院伦理委员会通过

2013年2月-2014年2月，标本采集;

2014年3月，试验阶段;

2014年3月-2014年5月，完成科研论文。

4. 预期研究成果

NEC患儿血清中的TLR4及肠型脂肪酸结合蛋白水平与严重程度呈正相关。