二、非选择题(共70分)

7.(12分)(2011•天津理综)下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。

请据图回答下面的问题。

(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用____________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上进行。

(2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是________(填字母代号)。

A.启动子        B.tetR

C.复制原点       D.ampR

(3)过程①可采用的操作方法是________(填字母代号)。

A.农杆菌转化      B.大肠杆菌转化

C.显微注射      D.细胞融合

(4)过程②采用的生物技术是_____________________________________________。

(5)对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的________性。

(6)为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用________(填字母代号)技术。

A.核酸分子杂交     B.基因序列分析

C.抗原—抗体杂交     D.PCR

解析　(1)由图示可知：需用HindⅢ和BamHⅠ限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因，因酶切后tetR四环素抗性基因结构被破坏而ampR结构完好，故用含氨苄青霉素的选择培养基可筛选含有重组载体的大肠杆菌。(2)启动子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶识别和结合的位点，可调控基因的特异性表达。(3)过程①表示把重组载体导入受体细胞的过程，当受体细胞为动物细胞时，常采用显微注射法。(4)过程②表示把早期胚胎移植到代孕母牛子宫的过程，属于胚胎移植技术。(5)经过程②得到新个体是细胞全能性的体现。(6)人乳铁蛋白基因是否成功表达，关键看是否有其表达产物即人乳铁蛋白，可用抗原—抗体杂交法检测该蛋白是否存在。

答案　(1)HindⅢ和BamHⅠ　氨苄青霉素　(2)A　(3)C  (4)胚胎移植技术

(5)全能　(6)C

8.(10分)(2011•北京宣武一模)植物组织培养是克隆植物的一种方法，过程如图所示，请据图回答相应的问题。

(1)为了获得脱毒植株，外植体往往取自植物的花芽、叶

芽等处的分生组织，其原因_________________________

________________________________________________。

(2)培养皿中的培养基除添加营养物质外，还需要添加植物激素，其目的是诱导外植体________________。

(3)在生产实践中为获得大量的细胞产物如紫杉醇，可将①________________放入液体培养基中，经机械作用分散成单个细胞，制备成细胞悬浮液，再经过________________即可获得大量细胞。

(4)组织培养过程需要植物生长和繁殖的最适条件，否则在光学显微镜下可能观察到发生________________异常，进而使植物出现遗传不稳定甚至不育。

(5)植物组织培养技术不仅应用于花卉、果树的快速、大量繁殖以及脱毒植株的获取，还广泛用于________________、________________、________________等育种过程中。

解析　(1)植物的花芽、叶芽等处的分生组织病毒极少，常被用于获得脱毒植株。

(2)植物组织培养过程中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。

(3)植物组织培养过程中，要获得细胞产物，只需要把外植体培养到愈伤组织阶段即可。

(4)光学显微镜下可能观察到的变异类型是染色体变异。

(5)植物组织培养技术广泛应用于花卉、果树的快速繁殖以及脱毒植株的获取和植物体细胞杂交育种、基因工程育种、单倍体育种等育种过程。

答案　(1)这些部位病毒极少　(2)脱分化和再分化　(3)愈伤组织　细胞分裂　(4)染色体结构与数目　(5)植物体细胞杂交育种　基因工程育种　单倍体育种

9.(8分)(2011•苏北四市二模)下图为单克隆抗体制备流程示意图。

(1)单克隆抗体制备技术的基础是_____________________________________________。

(2)细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，目的是________________。在细胞培养过程中，培养液中需要添加无机盐，但要注意无机盐的________________，以保证生命活动的正常进行。

(3)为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞/mL，每孔滴入0.1 mL细胞稀释液，其目的是____________________________。

(4)若用15N标记的氨基酸培养能产生单克隆抗体的细胞，放射性物质在细胞结构中出现的先后顺序是____________________________________________________________。

解析　(1)单克隆抗体利用了动物细胞融合和动物细胞培养的原理。

(2)HAT是选择培养基，该培养基是为了将杂交瘤细胞筛选出来。

(3)从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞/mL，每孔滴入0.1 mL细胞稀释液，其目的是将产生特定抗体的杂交瘤细胞筛选出来，使得到的抗体纯度更高。(4)参与单克隆抗体的合成、加工和分泌过程的细胞结构依次是核糖体、内质网、高尔基体和细胞膜。

答案　(1)动物细胞培养　(2)筛选杂交瘤细胞　种类和数量(浓度)　(3)使每个孔内不 多于一个细胞，达到单克隆培养的目的(或单一细胞培养以保证抗体的纯度)　(4)核糖体、内质网、高尔基体、细胞膜

▲(2011•江苏徐州学情分析)已知番茄的红果(Y)对黄果(y)为显性，二室(M)对多室(m)为显性，控制两对相对性状的基因分别位于两对同源染色体上。育种工作者利用不同的方法进行了如下四组实验。请据图回答下面的问题。

(1)图Ⅰ过程由番茄韧皮细胞形成幼苗A的过程要经过脱分化形成________，再分化形成幼苗，该过程依据的原理是________________。

(2)植物组织培养除了需要提供一定的营养、激素、温度和光照外，还必须在________的条件下培养。

(3)用红果多室(Yymm)番茄植株的花粉进行Ⅱ、Ⅲ有关实验，则Ⅱ过程中，从花粉形成幼苗B所进行的细胞分裂方式是________。植物体C的基因型有________________________________________________________________________。

(4)图Ⅲ、Ⅳ过程中需要去除细胞壁，此时要用到的酶是________。

(5)在图中Ⅳ过程中，通常植物体D能表现出两个亲本的遗传性状，根本原因是____________________________________________________________________。

解析　(1)Ⅰ中高度分化的植物细胞脱分化形成的是愈伤组织。而已分化的韧皮细胞再次成长为植物个体(幼苗)属于组织培养。其理论基础(原理)是植物细胞的全能性。(2)组织培养时由于营养物质丰富、外界环境条件(温度、光照、激素)优越，很适合生物生长，也特别适合细菌等微生物生长，为避免微生物过度繁殖对组织培养的影响，应保持组织培养的用具与环境无菌且进行无菌操作。(3)Ⅱ中花粉经组织培养直接长成的幼苗是单倍体，该过程属于单倍体体细胞的增殖，而体细胞增殖是通过有丝分裂完成的。植物体C是基因型为Yymm的植株的花粉经过花粉两两融合后形成的细胞A后，以组织培养方式得到的。依据基因分离定律可知，亲本为Yymm的植物的花粉基因型为Ym、ym。这样融合细胞A可能是Ym与Ym的花粉融合得到，也可能是ym与ym的花粉融合得到，还可能是Ym与ym的花粉融合得到。即融合细胞A的基因型可能是YYmm、yymm、Yymm。组织培养得到的植物体C是细胞A全能性的体现，故植物体C的基因型取决于细胞A。所以植物体C的基因型是YYmm、yymm、Yymm。(4)植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，根据酶的专一性，要去除植物细胞壁则必定要使用纤维素酶与果胶酶。(5)Ⅳ是植物体细胞杂交的过程。由于细胞B是番茄与马铃薯的体细胞融合而成，则细胞B具有番茄和马铃薯两亲本的遗传物质。植物体D是由细胞B经组织培养而成，细胞B的基因型决定了植物体D的基因型。故植物体D与细胞B一样具有两亲本的遗传物质。

答案　(1)愈伤组织　植物细胞的全能性　(2)无菌

(3)有丝分裂　YYmm、Yymm、yymm　(4)纤维素酶(纤维素酶和果胶酶)

(5)具有两个亲本的遗传物质