45.在日常生活中，一提到细菌、真菌及病毒这些微生物，人们往往首先想到它们的害处，其实，很多微生物对人类是有益的，它们与我们人类的关系非常密切，而且人类已经应用微生物造福于我们的生活。请回答下列问题：

(1)从自然界获得纯种酿酒酵母菌的基本程序：配制培养基→接种→培养→观察记录→纯化培养。

①采用平板划线法接种，开始接种时要灼烧接种环，目的是________________________。

②若葡萄汁中含有醋酸菌，在葡萄酒发酵旺盛时，醋酸菌能否将酒精转变成醋酸?________，原因是_________________________________________________________________。

(2)在腐乳的制作过程中，有多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是________。产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的________，________可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。

(3)利用纤维素解决能源问题的关键是高性能纤维素酶的获取。科学家利用培养基从土壤中选择出能分解纤维素的细菌，经过大量培养后可以从中提取纤维素酶。土壤中富含各种微生物，将土壤浸出液接种到特定培养基上，可得到能分解纤维素的细菌，实验室中获取纯净菌的常用方法有________和________。虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、__________________。

46.腐乳是我国独有的发酵食品，是当今国际推崇的高营养食品。某科研机构研究了腐乳生产过程中不同浓度的食盐对腐乳中氨基酸含量和pH的影响，其中部分数据如下。请回答下列问题。

后期发酵阶段腐乳氨基酸含量变化图

盐度(%)

时间(d)　　　 5 8 11

5 6.66 6.72 6.70

10 6.63 6.62 6.68

20 4.64 6.58 6.62

30 4.61 6.56 6.58

45 4.50 6.47 6.52

60 4.11 6.44 6.50

后期发酵阶段腐乳的pH(注：后期发酵阶段是指从腐乳装瓶后直到成熟的过程)

(1)腐乳生产过程有多种微生物的参与，其中起主要作用的是________________________。

(2)腐乳制备过程中，加盐可以________，使豆腐块变硬。

(3)由图可知，后期发酵过程中，随着时间的延长，腐乳中游离氨基酸的含量将________，蛋白质含量呈________趋势。这是由于前期发酵阶段________将豆腐中的蛋白质分解为小分子的物质。

(4)由表可知，后期发酵到60天时，盐度为________的腐乳已经腐败，说明________________________________________________________________________。

(5)综上研究结果，为了满足口味清淡消费者的需要，同时保证营养丰富、口感鲜美，在生产过程中应该使盐度控制在________左右。

47.“夫树橘柚者，食之则甘，嗅之则香”。每年的10月，正是柑橘大量上市的季节。橘子全身都是宝，不仅果肉的营养价值高，药用价值较高，其皮、核、络、叶都是“地道药材”。澳洲科学及工业研究机构的一项最新研究显示，每天吃1个橘子可以使人们避免某些癌症(如口腔癌、喉癌和胃癌)的侵袭。

(1)江南某橘子盛产地想建立一个大型的果酒果醋加工厂，需要发酵菌种酵母菌和醋酸菌，接种培养这两种微生物的最常用方法有________和________。

(2)植物芳香油的提取方法主要有蒸馏法、压榨法和________等。有人想提取橘皮精油获取利润，一般提取橘皮精油的方法是________法。

(3)四川一果汁加工厂在制作橘子汁的过程中发现果汁有些浑浊，为提高出汁率，可加入适量的________使果汁变得澄清，要提高此物质的利用率，可采用________技术。

(4)某橘农发现自家一株橘树具有抗虫性状，欲利用组织培养技术大量繁殖。若用花药进行离体培养则应选择花粉发育至________期的花药培养成功率最高。确定花粉发育时期最常用的方法有________法。

48.普通棉花中含β-甘露糖苷酶基因(GhMnaA2)，能在纤维细胞中特异性表达，产生的β-甘露糖苷酶催化半纤维素降解，棉纤维长度变短。为了培育新的棉花品种，科研人员构建了反义GhMnaA2基因表达载体，利用农杆菌转化法导入棉花细胞，成功获得转基因棉花品种，具体过程如下。请分析回答：

(1)①和②过程中所用的限制性内切酶分别是 、 。

(2)基因表达载体除了图示组成外，至少还有 　 　 　等(至少答两个)。

(3)③过程中用酶切法可鉴定正、反义表达载体。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切正义基因表达载体获得0.05kb、3.25kb、5.95kb、9.45kb四种长度的DNA片段，则用NotⅠ酶切反义基因表达载体获得DNA片段的长度应是 　 　和 　　 。

(4)④过程中利用农杆菌介导转化棉花细胞的过程中，整合到棉花细胞染色体DNA的区段是 ，转化后的细胞再通过 形成植物体。

(5)导入细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而抑制基因的表达，其意义是 。

49.如图是通过土壤农杆菌与植物细胞原生质体共培养的方法获得转基因植物的过程。请回答下列问题。

(1)图a表示从已经消毒的叶片中剪取部分植物组织细胞。图b表示用________________酶来制备原生质体。

(2)图c表示用培养基培养原生质体，为了防止原生质体________，培养基的浓度要适宜。培养一段时间后，将其与________共同培养，使携带目的基因的________进入植物细胞。然后通过离心(图d)的方法，除去多余的土壤农杆菌。

(3)图e表示将原生质体培养成________，然后将其转移到含有一定抗生素的________培养基中进行筛选培养(图f)。

(4)将获得的含有目的基因的愈伤组织转移到________培养基中继续培养(图g)，同时注意调整________的种类和________，最终获得完整的植株(图h)。