25.某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答下列问题。

(1)培养基中加入化合物A的目的是 ，这种培养基属于 培养基。

(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的 。实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是 。

(3)在上述实验操作过程中，获得纯净“目的菌”的关键是 。

(4)转为固体培养基时，常采用平板划线的方法进行接种，此过程中所用的接种工具是 ，操作时采用 灭菌的方法。

(5)实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是 。

(6)某同学计划统计污水池中“目的菌”的总数，他选用10-4、10-5、10-6稀释液进行平板划线，每种稀释液都设置了3个培养皿。从设计实验的角度看，还应设置的一组对照实验是 ，此对照实验的目的是 过程中是否被杂菌污染。

24.(8分)请分析回答下列有关生物技术实践方面的问题：

Ⅰ.现有磨浆机、烧杯、滴管、量筒、玻璃棒、漏斗、纱布、苹果、试管、蒸馏水、质量分数为2%的果胶酶溶液、一定浓度的盐酸和氢氧化钠溶液，下表是某小组利用上述材料进行的有关实验：(“/”表示不加)， 请回答下列问题：

操作顺序 项目 烧杯 甲 乙 丙 丁 1 加入苹果泥 20ml 20ml 20ml 20ml 2 ① 2ml / 2ml 2ml 3 加入不同液体 2ml蒸馏水 2ml蒸馏水 2ml盐酸溶液 2ml氢氧化钠溶液 4 水浴恒温，玻璃棒搅拌 15分钟 15分钟 15分钟 15分钟 (1)表中①处的内容是 。

(2)比较烧杯甲、丙、丁的结果可知： 能影响酶的活性。

(3)若要验证果胶酶的作用，应把 两个烧杯同时取出并过滤相同时间，观察并比较 。

Ⅱ.从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的是 法;一般情况下，提取胡萝卜素时，提取效率与原料颗粒的含水量成 比;将提取 的胡萝卜素粗品通过纸层析进行鉴定的结果如右图所，请据图回答。

A、B、C、D四点中，属于标准样品的样点是 ;乙代表的物质是 。

参考答案

1.B

【解析】培养基的灭菌可采用高压灭菌，要求高温、高压且30分钟左右才能将芽孢杀死，实现灭菌。

2.B

【解析】从土壤中筛选蛋白酶产生菌时，可以在培养基中添加牛奶或酪素制备培养基平板，微生物生长时若产生蛋白酶，则会水解牛奶或酪素，在平板上形成透明的蛋白质水解圈。

3.A

【解析】

4.D

【解析】

试题分析：亲本植株的生理状况对诱导成功率也有直接影响，早期的花药比后期的花药更容易产生花粉植株，D错误。

考点：本题考查植物组织培养相关知识， 意在考查考生的应用能力。

5.A

【解析】本题考查的是微生物的有关内容。菌落是微生物子细胞群，有的菌落是由一种细菌大量繁殖而成，A错。故本题选A。

6.B

【解析】

试题分析：稀微生物接种常用的方法有稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法等，这两种方法不需要特殊的仪器设，分离纯化效果好。

考点：考查菌种接种技术，意在考查学生能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论。

7.B

【解析】细菌生长的最适pH为6.5~7.5，该培养基适宜细菌生长。该培养基添加了伊红与美蓝，可鉴别大肠杆菌，为鉴别培养基。乳糖和蔗糖为碳源，蛋白胨为氮源，还可提供生长因子。

8.D

【解析】

试题分析：

培养微生物都必须要有水、无机盐、碳源、氮源和生长因子;该培养基内含有纤维素粉，因为能够分解纤维素的菌类才能大量繁殖;选D。

考点：选择培养基。

点评：试题相对简单，注重基础知识的考查。

9. D?

【解析】 本题考查的知识有：①各种微生物的代谢类型，②微生物所需的能源、碳源和氮源的不同。解答此题时应明确：硝化细菌、乳酸菌属于细菌，酵母菌属于真菌，衣藻属于真核生物。微生物所需的能源、碳源、氮源因其同化作用类型的不同而不同。

10.D

【解析】本题考查的是选择培养基的有关内容。由题意可知，培养基中加入化合物A的目的是筛选能高效降解化合物A的“目的菌”，A正确;“目的菌”生长所需的氮源和碳源都自化合物A，B正确;由于培养基中含有机物A，所以“目的菌”的代谢类型是异养需氧型，C正确;该培养基不可直接进行植物组织培养，缺少植物激素，D错。故本题选D。

11.C

【解析】

试题分析：分离土壤中分解尿素的细菌的原理是在以尿素为唯一氮源的培养基上，只有能分解尿素的细菌才能以尿素为氮源生长繁殖，不能分解尿素的细菌因缺乏氮源而无法生长繁殖.

解：分解尿素的细菌是异养微生物，因此培养基中应该加入有机碳源，如葡萄糖;分离分解尿素的菌的培养基从功能上分属于选择培养基，应该以尿素为唯一氮源;从物理性质上分属于固体培养基，因此应加入凝固剂琼脂糖.

故选：C.

点评：对于分离土壤中分解尿素的细菌的原理及根据培养物和培养目的选择培养基配方的理解应用、并把握知识点间的内在联系是解题的关键.

12.B

【解析】

试题分析：秋天的菠菜中也富含叶绿素，做色素提取和分离实验中也能得到四种色素，故A错误。乙图如果表示正在发生质壁分离的细胞，其失去水分较多，吸水能力是逐渐增强的，故B正确。丙图中锥形瓶封口放置是为了保证进行无氧呼吸，故C错误。丁图中培养洋葱根尖时，洋葱底部应接触到烧杯内液面，故D错误。

考点：本题考查生物学实验相关知识，意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度。

13.C

【解析】

试题分析：本题是对提取玫瑰油的实验流程、提取胡萝卜素的实验流程、泡菜中亚硝酸盐含量的测定的实验步骤、果酒和果醋的制作的流程的考查，回忆提取玫瑰油的实验流程、提取胡萝卜素的实验流程、泡菜中亚硝酸盐含量的测定的实验步骤、果酒和果醋的制作的流程，然后分析选项进行解答.

解：A、水中蒸馏法提取玫瑰油的实验流程是：鲜玫瑰花+清水→水蒸气蒸馏→油水混合物→分离油层→除水→玫瑰油，A正确;

B、提取胡萝卜素的实验流程是：石灰水浸泡→漂洗→压榨→萃取→浓缩→过滤→胡萝卜，B正确;

C、泡菜中亚硝酸盐含量的测定的实验步骤是：配制溶液→制备标准显色液→制备泡菜样品处理液→比色，C错误;

D、果酒和果醋的制作的流程是：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵(果酒)→醋酸发酵(果醋)，D正确.

故选：C.

点评：对提取玫瑰油的实验流程、提取胡萝卜素的实验流程、泡菜中亚硝酸盐含量的测定的实验步骤、果酒和果醋的制作的流程的记忆是本题考查的重点.

14.A

【解析】野生植物属于天然的培养基，含有微生物生长的各种成分，包括生长因子。

15.B

【解析】

16.D

【解析】

试题分析：酒精具有消毒的作用，对酵母菌同样有毒害作用，A正确;酒精含量达到12%～16%时，其中的营养物质被消耗，很难维持大量酵母菌的代谢需要，B正确;酒精发酵过程中，产物二氧化碳等积累使pH值发生改变，C正确;酒精发酵是进行无氧呼吸，不需要氧气，D错误。

考点：本题考查酵母菌的细胞呼吸，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络的能力。

17.B

【解析】

18.C

【解析】

试题分析：微生物培养时采用高压蒸汽灭菌，压力为100kPa， 故A错误;倒平板时，约10到20mL培养基，故B错误;接种最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，故D错误;实验结束后带菌培养基应加热后再倒掉，故C正确。

考点：本题主要考查微生物培养，意在考查考生能理解和记忆所学知识的要点的能力。

19.D

【解析】使用过的培养基必须经过灭菌处理后再丢弃，经消毒可能还会存在细菌的芽孢。

20.B

【解析】分解葡萄糖的酶属组成酶;不管环境中是否有葡萄糖，该酶都要存在于大肠杆菌的细胞中。分解乳糖的酶属诱导酶;只有当环境中的葡萄糖被耗尽且有乳糖存在时，控制该酶的基因才表达，该酶才被合成。大肠杆菌利用营养物质的这种调节方式属于酶合成调节。

21.(1)重铬酸钾 灰绿 (2)果胶酶 (3)③包埋法 体积大的细胞难以被吸附或结合，但它不容易从包埋材料中漏出

(4)室温 活化 CaCl2 海藻酸钠溶液浓度偏低 海藻酸钾浓度偏高

【解析】

试题分析：(1)常用检测酒精的方法是酒精在酸性条件下和重铬酸钾溶液呈灰绿色。

(2)为提高果汁的出汁率及使果汁变得澄清，在果汁生产中常用到果胶酶。

(3)根据图解，①是化学结合法，②是物理吸附法，③是包埋法。一般来说，酵母细胞的固定多采用包埋法，而酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定，这是因为细胞体积大，而酶分子小，体积大的的细胞难以被吸附或结合，而体积小的酶则容易从包埋材料中漏出。

(4)制作固定化酵母细胞时，要将已冷却至室温的溶化好的海藻酸钠溶液与已活化的酵母细胞充分搅拌，经充分混合均匀的酵母细胞溶液可在饱和的CaCl2溶液中形成凝胶珠。在包埋过程中，如果所用海藻酸钠溶液浓度偏低，则在饱和CaCl2溶液中形成的凝胶珠颜色会过浅、呈白色;如果海藻酸钠溶液浓度偏高，则得到的凝胶珠可能不是圆形或椭圆形的。

考点：本题考查果酒生产及固定化细胞的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识的网络结构的能力。

22.(9分)(1) B (2)①重铬酸钾 灰绿 ②蒸馏水

(3) 2 (4)对原材料进行灭菌

(5)防止菌种流失

(6)没有分解这些物质的酶

【解析】酵母菌发酵葡萄糖，所以用麦芽汁琼脂培养基，酒精在酸性环境中与重铬酸钾呈现灰绿色，随着发酵的进行，酒精不断增多，使生物膜的透性增大，存在液泡中的色素进入发酵液而呈现灰绿色。在微生物培养过程中，有一个微生物培养形成的集合成为一个菌落;海藻钠作为载体固定酵母细胞是固定化细胞技术的载体之一，从表中数据分析，第二天就适宜固定化，防止杂菌污染通常对原材料进行灭菌。冲洗应特别注意不能反复冲洗，原因是防止酵母菌流失而不能发酵，由果酒制作果醋，通常通入氧气和醋酸菌，酵母菌体内没有分解木质素、纤维素和半纤维素的酶，所以酵母菌无法利用。

23.(1)长期被石油污染(含石油多的)

(2)石油作为微生物生长的唯一碳源

(3)自养厌氧型 降油圈大的菌落

【解析】

试题分析：(1)土壤取样，应从长期被石油污染的土壤中采集。

(2)从功能上分，应选用选择培养基进行筛选和纯化该类微生物，此培养基中应该添加石油作为唯一碳源，培养基需要用高压蒸汽灭菌法灭菌，常用的接种方法平板划线法和稀释涂布平板法。

(3)该类微生物是厌氧微生物，代谢类型为自养厌氧型，接种后应密封培养，一段时间后选择降油圈大的菌落进行培养可获得高效菌株。

考点：本题主要考查生物技术的相关知识，意在考查考生对相关知识的理解，把握知识间的内在联系的能力。

25.(1)筛选目的菌 选择 (2)化合物A 异养需氧型 (3)防止外来杂菌入侵 (4)接种环(2分) 灼烧(2分)(5)防止造成环境污染(2分)(6)不接种的空白培养基(2分) 证明培养基制备(2分)

【解析】

试题分析：(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选出能分解A的目的菌，该培养基为选择培养基。

(2)据该培养基成分分析，A提供氮源和碳源。实验需要振荡培养，目的提供氧气，需要有机物A，故该细菌为异养需氧型。

(3)获得纯净“目的菌”的关键是防止外来杂菌入侵，需要灭菌。

(4)平板划线法所用的接种工具是接种环，操作时采用灼烧灭菌。

(5)实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是防止外来杂菌入侵，以获得纯净“目的菌”。

(6)为了证明培养基制备过程中是否被杂菌污染，还要设置一组对照组：不接种的空白培养基，判断是否有杂菌生长。

考点：本题考查微生物的培养与运用相关知识，意在考查考生能独立完成“生物知识内容表”所列的生物实验，包括理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用能力。

24.(每空1分，共8分)

I.(1)质量分数为2%的果胶酶溶液 (2)pH值(酸碱度)或pH(酸碱度)是否

(3)甲与乙 果汁的体积与澄清度

II.萃取 反 A和D 其他色素和杂质

【解析】

试题分析：I。(1)依据提供实验材料应是质量分数为2%的果胶酶溶液。

(2)甲、丙和丁的自变量是酸碱度的不同，故是酸碱度影响酶的活性。

(3)甲和乙的自变量是否加入果胶酶，要验证果胶酶的作用就应去甲和乙进行比较，因为果胶酶能分解细胞壁提高果汁的清亮度，因此可以比较二者的清亮度。

II.(1)提取胡萝卜素常用萃取法，提取效率与原料颗粒的含水量成反比，图中因为A和D没有其它色素带，因此A和D应是标准样品，乙是提取出的其它色素和杂质。

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