解析：DNA在NaCl溶液中的溶解度与洗涤剂无关;向溶解有DNA的试管中加入少量二苯胺试剂，混匀后沸水浴加热，溶液变蓝，而不是冷却后变蓝;细胞中可能含有分解DNA的酶，从而影响到DNA的提取;DNA可以吸附在玻璃棒上，用玻璃棒缓慢搅拌可以增加DNA的提取量。

答案：C

9.科学家将β干扰素基因进行定点突变后导入大肠杆菌，表达出的干扰素的第十七位氨基酸由半胱氨酸变成了丝氨酸，新表达的干扰素不仅大大提高了β干扰素的抗病活性，还提高了其储存稳定性。该生物技术为(　　)

A.基因工程 B.蛋白质工程

C.基因突变 D.细胞工程

解析：基因工程是通过对基因的操作，将符合人们需要的目的基因导入适宜的生物体，使其高效表达，获得所需的蛋白质，得到的蛋白质仍然为天然存在的蛋白质;而蛋白质工程是对控制蛋白质合成的基因进行改造，从而实现对其编码的蛋白质的改变，所得到的已不是天然的蛋白质。题目中的β干扰素基因经过改造，已经不是原来的基因，其合成的β干扰素也不是天然β干扰素，而是经过改造的，是人类所需优质的蛋白质，因而整个过程利用的生物技术应为蛋白质工程。

答案：B

10.下图是获得抗虫棉的技术流程示意图。卡那霉素抗性基因(kanR)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下列叙述正确的是(　　)

A.构建重组质粒过程中需要限制性内切酶和DNA连接酶

B.愈伤组织的分化产生了不同基因型的植株

C.卡那霉素抗性基因(kanR)中有该过程所利用的限制性内切酶的识别位点

D.抗虫棉有性生殖后代能保持抗虫性状的稳定遗传

解析：质粒与目的基因结合时需要用相同的限制性内切酶切割，切出的黏性末端相同，再用DNA连接酶连接;愈伤组织由相同的细胞分裂形成，分化后产生的是相同基因型的植株;卡那霉素抗性基因作为标记基因不能有限制性内切酶的切割位点，标记基因被切断后就不能再表达，从而失去作用;抗虫棉为杂合子，其有性生殖后代会发生性状分离，抗虫性状不一定能稳定遗传。

答案：A

11.下列关于蛋白质工程和基因工程的比较，不合理的是(　　)

A.基因工程原则上只能生产自然界已存在的蛋白质，而蛋白质工程可以对现有蛋白质进行改造，从而制造一种新的蛋白质

B.蛋白质工程是在基因工程的基础上发展起来的，蛋白质工程最终还是要通过基因修饰或基因合成来完成

C.当得到可以在-70 ℃条件下保存半年的干扰素后，在相关酶、氨基酸和适宜的温度、pH条件下，干扰素可以大量自我合成

D.基因工程和蛋白质工程产生的变异都是可遗传的

解析：基因工程原则上只能生产自然界已存在的蛋白质，而蛋白质工程可以对现有蛋白质进行改造，从而制造一种新的蛋白质;蛋白质工程是在基因工程的基础上发展起来的，蛋白质工程最终还是要通过基因修饰或基因合成来完成，这样产生的改变才能遗传下去;蛋白质不能自我合成;由于基因工程和蛋白质工程都是对基因进行操作，因此，基因工程和蛋白质工程产生的变异都是可遗传的。

答案：C

12.如图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ在内的多种酶的酶切位点。据图回答：

(1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有________、________、________三种。

(2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是________;若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是__________________________。

(3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是________，其合成的产物是________。

(4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒自身环化，酶切时应选用的酶是________。

解析：将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoR Ⅰ酶切，所产生的黏性末端相同，用DNA连接酶处理后，不同的片段随机结合，由两个DNA片段之间连接可形成3种不同的产物。将这3种连接产物导入受体菌后，可根据不同连接产物所携带抗性基因的差异选择不同的选择培养基进行筛选。由图示和题目中提供的信息可知，同时应用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ进行酶切可有效防止目的基因和质粒自身环化。

答案：(1)目的基因—载体连接物 　载体—载体连接物

目的基因—目的基因连接物 　 (2)载体—载体连接物

目的基因—载体连接物、载体—载体连接物 　(3)启动子 　 mRNA　(4)EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ(不能只答一种酶)

13.[2015·淮安三调]下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料，请分析回答下列问题。

资料1：巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌，能将甲醇作为其唯一碳源，此时AOX1基因受到诱导而表达[5’AOX1和3’AOX1(TT)分别是基因AOX1的启动子和终止子]。

资料2：巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以科学家改造出了pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达。

(1)如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上________、________限制酶识别序列，这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化。

(2)酶切获取HBsAg基因后，需用________将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取________。

(3)步骤3中应选用限制酶________来切割重组质粒获得重组DNA，然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。

(4)为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入卡那霉素以便筛选，转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用________方法进行检测。

解析：(1)重组质粒上的目的基因若要表达，需要目的基因的首尾分别含有启动子和终止子。而SnaB Ⅰ、AvrⅡ识别的序列在启动子与终止子之间，只要在目的基因两侧A和B位置分别接上这两种序列，并用SnaB Ⅰ、AvrⅡ这两种限制酶对质粒和目的基因同时切割，便会各自出现相同的黏性末端，便于重组与表达，同时防止自身环化，因此在HBsAg基因两侧的A和B位置接上SnaB Ⅰ和AvrⅡ限制酶的识别序列。(2)用DNA连接酶将切割后的HBsAg基因和pPIC9K质粒连接成重组质粒;导入大肠杆菌体内，目的是利用大肠杆菌无性繁殖速度快，短时间内可获取大量的重组质粒。(3)Bgl Ⅱ限制酶不会破坏目的基因两侧的启动子、终止子。

答案：(1)SnaB Ⅰ　Avr Ⅱ　(2)DNA连接酶 　大量重组质粒 　 (3)Bgl 　 (4)DNA分子杂交

14.已知SARS是由一种RNA病毒感染所引起的疾病。SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在SARS病人康复后的血清中有抗S蛋白的特异性抗体。某研究小组为研制预防SARS病毒的疫苗开展了前期研究工作，其简要的操作流程如下：

(1)实验步骤需要一种特殊的酶，该酶是________。

(2)步骤构建重组表达载体A和重组表达载体B必须使用的酶有________和________。为了使S基因和载体结合，需要注意的是________，原因是________________________________________。

(3)经过、产生的S蛋白________(填“一样”或“不一样”)，原因是______________________________。

(4)为了检验步骤所表达的S蛋白是否与病毒S蛋白有相同的免疫反应特性，可用________与________进行抗原—抗体特异性反应实验。

解析：(1)实验步骤是由RNA合成DNA，所以需要的特殊酶是逆转录酶。(2)要使目的基因与载体结合，必须使用同种限制酶处理它们，以获得相同的黏性末端。(3)虽然图解中使用了不同的受体细胞，但由于目的基因相同，所以表达出的蛋白质也相同。(4)生产的S蛋白相当于抗原，若其与病毒S蛋白有相同的免疫反应特性，应能与SARS康复患者血清中的抗体发生特异性结合。

答案：(1)逆转录酶 　 (2)限制性核酸内切酶 　 DNA连接酶　用同种限制酶处理S基因和载体 　 只有这样才能使目的基因和载体具有相同的黏性末端，它们才能得以重组 　 (3)一样　所用的目的基因携带的遗传信息相同 　 (4)大肠杆菌中表达的S蛋白 　 SARS康复病人的血清

15.胰岛素可以用于治疗糖尿病，但是胰岛素被注射到人体后，会堆积在皮下，要经过较长的时间才能进入血液，而进入血液的胰岛素又容易分解，因此，治疗效果受到影响。如图是用蛋白质工程设计速效型胰岛素的生产过程，请据图回答有关问题：

(1)构建新的蛋白质模型是蛋白质工程的关键，图中构建新的胰岛素模型的主要依据是________。

(2)通过DNA合成形成的新基因应与________结合后转移到________中才能得到准确表达。

(3)若要利用大肠杆菌生产速效胰岛素，需用到的生物工程有________、________和发酵工程。